Об’єм еякуляту
Його найзручніше визначати за допомогою вагів. Спочатку зважують кухоль для забору сперми з фільтр-пакетом, передають для взяття сперми, потім зважують кухоль зі спермою й за різницею показників визначають її вагу. Вага у грамах приблизно дорівнює об’єму в мілілітрах.
Об’єм еякуляту можна визначати за допомогою мірного циліндра. Однак для цього таких посудин треба багато. До того ж їх треба постійно мити й дезінфікувати. Тому в більшості лабораторій штучного запліднення для визначення об’єму еякуляту користуються вагами. Найчастіше у кнурів буває 100–350 мл еякуляту.
Візуальна оцінка
Візуально оцінюють колір, наявність забруднень та запах. Колір — від білого до кремового і сіро-білого. Чим еякулят біліший, тим більша в ньому концентрація сперматозоїдів. Наявність гною свідчить, що у кнура розвивається запальний процес, а це потребує негайного лікування.
Зазвичай сперма не має особливого запаху. Різкий запах сечі свідчить про те, що до еякуляту потрапила препуціальна рідина. Таку сперму використовувати для ШЗ не можна. А от гнильний запах свідчить про запальний процес. Таку сперму також використовувати не можна.
Інколи екстракт цибулинних залоз («пробка»), який потрапляє до еякуляту, має коричнюватий колір. З часом він прозорішає. При інших задовільних показниках таку сперму можна використовувати.
Концентрація
Для визначення концентрації сперматозоїдів найчастіше використовують спеціальні фотометри. Ними треба користуватися згідно з інструкцією. Сперму зазвичай наливають у спеціальну кювету (яка може бути з розчином або без) й у фотометрі визначається концентрація. Якщо використовують багаторазові кювети, після кожної проби їх треба ретельно мити й полоскати дистильованою водою та дезінфікувати жаром. Якщо на поверхні кювети залишаться плями від солей, вони можуть вплинути на результат (прилад покаже більшу концентрацію, ніж є насправді). Обов’язково повинні бути бланкірувальні кювети. Крім того, слід своєчасно проводити верифікацію приладів.
Концентрацію також можна визначати за допомогою камери Горяєва, але це досить трудомісткий процес, який, до того ж, забирає багато часу і потребує певних навичок.
Оцінка рухливості сперміїв.Визначення відсоткасперміїв з прямолінійно-поступальних рухом (ППР)
Оцінку рухливості нативної сперми проводять одразу ж після її забору. Спочатку готуємо розчин сперми і розчинника (мін. 1:2), плавно перемішуємо. На попередньо нагріте предметне скло (37—38°С) наносимо краплю розведеної сперми. Крапля повинна бути невелика (приблизно 30 мкл). Якщо крапля завелика або замала, оцінювати рухливість незручно. Акуратно на краплю кладемо попередньо нагріте покривне скло й оцінюємо кілька ділянок під 100- та 400-кратним збільшенням. Оцінювання ППР проводиться з точністю до 5%. Допускається до використання сперма з ППР, більшим за 70%.
Оцінку рухливості розчиненої сперми, яка зберігалася, проводять тільки після її попереднього нагрівання. Нагрівати зразки досліджуваної сперми необхідно у водяній бані при температурі 38°С мінімум 15 хвилин, особливо якщо використовується розчинник для тривалого зберігання. Бо інакше можна зробити хибну оцінку рухливості сперміїв і означити сперму, яка «спить», мертвою. До запліднення допускається сперма з рухливістю понад 60%.
Морфологічна оцінка
Спермій кнура складається із головки (7 μm), серединної частини (0,7 μm) та хвостика (37,1 μm).
Будова спермія
Морфологічну оцінку сперміїв проводять під мікроскопом при збільшенні у 200–400 разів після завершення руху сперміїв. Найзручніше для цього використовувати фазово-контрастний мікроскоп (табл.1-3).
Таблиця 1. Мінімальні показники якості сперми впродовж доби після забору еякуляту (Kevin J. Evaluating Boar Semen Quality. Animal Science Facts)
Таблиця 2. Оцінка результатів при суправітальному забарвленні (оцінюємо, поки не нарахуємо 50 сперматозоїдів)
Таблиця 3. Приклад журналу лабораторії ШЗ
Розглянемо основні дефекти сперми.
Основні фактори, що впливають на якість та кількість сперми (до того,як сперма потрапить у лабораторію ШЗ)
- Порода. Кількість еякуляту залежить від породи кнура. Найбільше дають кнури породи Ландрас, дещо менше Велика Біла — приблизно 300–400 мл. Кнури породи Дюрок та П’єтрен переважно дають 100–180 мл еякуляту, але з більшою концентрацією сперматозоїдів. У різних порід сперма відрізняється також за морфологією (різна довжина хвостиків та параметри головки спермія).
- Частота забору сперми і вік кнура. Чим кнур старший, тим більше еякуляту він може дати. Суттєве збільшення цих показників має місце з 8- до 16-місячного віку, а потім стабілізується. Загальна кількість сперматозоїдів в еякуляті також стає більшою, але концентрація зменшується зі збільшенням кількості. Оптимальна частота забору сперми в молодих кнурів — 1 раз на 7 днів, старших за 12–18 міс. — 1 раз на 5 днів. Якщо забір сперми проводити частіше, якість погіршується і її стає менше (сім’яники не встигають виробити достатню кількість зрілих сперміїв).
Техніка та гігієна забору сперми. Під час цієї процедури треба унеможливити потрапляння препуціальної рідини до еякуляту, бо це спричиняє загибель сперміїв. Потрапляння бруду й бактерій призводить до аглютинації сперміїв, недовготривалого зберігання матеріалу, а при сильному забрудненні — неможливість використання для ШЗ.
На об’єм еякуляту також впливає техніка забору, а саме — сила стиснення пеніса й температура руки. Якщо кнуру не до вподоби те, як тримають пеніс, він може віддати сперми набагато менше або й узагалі не еякулювати. Також кнури не люблять холодних рук (узимку бажано перед забором сперми потерти руки без рукавиць одна об одну).
- Здоров’я кнура. Коли кнур має якісь захворювання, особливо ніг, він неохоче стрибає на фантом, віддає менше сперми (бо не може довго триматися на фантомі). При запальних процесах у статевій системі якість сперми може значно погіршитися, з’являються морфологічні дефекти (аглютинація, поламані хвостики, мертва сперма).
- Вакцинація. Після вакцинації можливе погіршення якості сперми, особливо в молодих кнурців, яких вакцинують уперше. Бажано скласти графік вакцинації так, щоб зробити всі щеплення мінімум за 2 тижні до початку привчання кнурів до фантома.
- Склад комбікорму та схема годівлі. Незбалансований за білком корм із часом може спричинити зміни якості сперми, незбалансований за кальцієм, фосфором та іншими мінералами — проблеми з ногами. Надмірна годівля кнурів, особливо термінальних, призводить доїх швидкого погладшання, що, в свою чергу, негативно позначається на лібідо. При ожирінні кнур узагалі перестає проявляти цікавість до фантома.
- Температура навколишнього середовища. При температурі вище 23°С якість сперми значно погіршується. У деяких кнурів вона мертвіє вся. Її якість відновлюється через 40 діб після того, як температура стає нормальною. Для недопущення сезонного погіршення якості сперми у кнурівнику треба встановлювати системи охолодження. До речі, в різних кнурів під час спеки спостерігаються різні зміни якості сперми. Найгіршою сперма стає у найкращих кнурів.
- Порушення у сперматогенезі. Порушення сперматогенезу може відбутися унаслідок крипторхізму, природженого недорозвинення або відсутності одного або обох сім’яників, генетичних порушень, при травмах сім’яників. Часто аспермія спостерігається при заростанні канальців сполучною тканиною.